Minden, amit tudni kell a COVID-19 tesztekről

A vírusról

  • A SARS-CoV-2 a koronavírusok családjába tartozó vírus, mely súlyos, akut légzőszervi szindróma képében jelentkező betegséget okoz.
  • Elsősorban cseppfertőzéssel terjed, köhögés vagy tüsszentés útján, a fertőzött betegekkel való kontaktusba kerülés esetén.
  • A fertőzés lappangási ideje átlagosan három-hét nap (maximum 14 nap).
  • Tünetei elsősorban: láz, köhögés, légzési nehezítettség és fáradtság.
  • A legtöbb betegnél a fertőzés enyhe lázas betegség formájában nyilvánul meg, azonban elsősorban idős vagy krónikus betegségben szenvedőknél súlyos, akut légzési distressz szindróma (ARDS) is kialakulhat.
  • A betegség az esetek egy részében halállal végződik, korcsoportos bontás alapján a mortalitási valószínűség 0,2-14,8% között alakul a 10-80+ éves korosztályban.
  • A férfiak halálozási kockázata majdnem kétszerese a nőkének.
  • 2020 februárjában a SARS-CoV-2 által okozott betegséget a WHO COVID-19-nek nevezte el.

Az alábbi ábra azt mutatja, hogy egymáshoz képest időben a vírus RNS, a vírus antigén és a vírus ellen termelődött ellenanyagok mikor jelennek meg és mikor válnak kimutathatóvá. Látszik, hogy legkorábban a vírus RNS-e mutatható ki, az antigén néhány nappal később kezd el pozitívvá válni, az ellenanyagok szintje pedig kb. 7-10 nappal a fertőzés kezdetét követően kezd el emelkedni a vérben.

A SARS-CoV-2 fertőzések diagnosztikájában többféle laboratóriumi módszer is alkalmazható:

  1. a vírus RNS (a vírus örökítőanyaga) közvetlen kimutatása PCR (polimeráz láncreakcióval) légúti mintából,
  2. a vírus antigén (a vírus fehérje alkotóelemei) kimutatása rapid fluoreszcens immunoassay-vel légúti mintából,
  3. a vírus elleni antitestek kimutatása vérből.

Az egyes vizsgálati módszerek használhatósága és az általuk szolgáltatott eredmények információtartalma más és más, így szerepük eltérő a diagnosztikai láncban.

1. PCR
   (RT-QPCR: REVERZ TRANSZKRIPTÁZ KVANTITATÍV POLIMERÁZ LÁNCREAKCIÓ)

A legspecifikusabb és legérzékenyebb vizsgálati módszer a vírus jelenlétének igazolására, mivel annak örökítőanyagát (RNS) mutatja ki a vizsgált mintából. Kritikus jelentőségű a COVID-19 kezdeti megelőzésében a pandémiás terjedés szempontjából.

A SYNLAB által jelenleg alkalmazott teszt a vírus genetikai állományának 3 szakaszát vizsgálja: kimutatja az E gént, az RdRP gént és a magasabb érzékenységű N gént is, így az általunk használt PCR reakció igen nagy érzékenységűnek tekinthető.

Hogyan történik a vizsgálat?

  • Felső légúti minta (orrból és garatból történő mintavétellel) küldhető vizsgálatra.
  • Eredmény: a vizsgálatot végző laboratóriumba érkezéstől számítva 24-48 órán belül.

Mik az előnyei?

  • A vírus légúti jelenlétének igazolására a legjobb, gold standardnak tekinthető módszer.
  • Kiváló érzékenység és magas specificitás jellemzi.
  • A fertőzőképesség legjobb vizsgálati módszere.

Mik a korlátai?

  • Hosszadalmasabb mintavételi folyamat és várakozási idő az eredményre.
  • A mintavétel speciális mintavételi eszközt és szaktudást igényel, kellően képzett és gyakorlott személy végezheti védőfelszerelésben.
  • A nem megfelelő mintavétel álnegatív eredményhez vezethet.
  • A vizsgálat kivitelezése és értékelése magas szaktudást igényel, csak speciális felszereltségű molekuláris diagnosztikai laboratóriumban végezhető el.
  • A folyamat számos, egymásra épülő lépésből áll, melyek mindegyike több órát is igénybe vehet, ezért hosszabb idő szükséges a lelet elkészüléséig.

A PCR a legdrágább teszt a COVID-19 diagnosztikai lehetőségek között. Egyéni páciensek vagy kisebb közösségek vizsgálata esetén mindenképpen ez javasolt, nagyobb közösségek tesztelésénél más kivizsgálási algoritmus is alkalmazható lehet.



2. RAPID ANTIGÉN TESZT

Magas specificitású, a PCR-hez képest alacsonyabb érzékenységű, de annál olcsóbb vizsgálati módszer. A vírust közepes vagy magas mennyiségben ürítő páciensek légúti mintáinak elemzése során a vírus S-proteinjét mutatja ki. Abban az esetben ideális teszt, ha nagy a valószínűsége a COVID-19 fertőzésnek és ezt szeretnénk gyorsan igazolni. (Ha a fertőzés esélye alacsony, akkor inkább a PCR a választandó eljárás.)

Alacsonyabb érzékenysége miatt a negatív eredmény nem zárja ki az éppen aktuális fertőzés fennállását, így ezt meg kell erősíteni az RT-PCR vizsgálattal.

Hogyan történik a vizsgálat?

  • Felső légúti minta (orrból és/vagy garatból történő mintavétellel) küldhető a vizsgálatra.
  • Eredmény: a vizsgálatot végző laboratóriumba érkezéstől számítva akár 15 perc/minta is lehet.

Mik az előnyei?

  • A vírus légúti jelenlétének igazolására szolgáló, kiváló specificitású (fluoreszcens detektálási módszeren alapuló) gyors metodika.
  • Támogatja a gyors döntéshozatalt olyan helyzetekben, ahol a fertőzöttek mielőbbi elkülönítése szükséges.
  • A gyorsteszt leolvasását speciális leolvasó eszköz (fluoreszcens reader) segíti, így azt nem kell szemmel értékelni.
  • A teszt elvégzéséhez és értékeléséhez professzionális laboratóriumi személyzetre és háttérre van szükség, mégsem szükséges speciális molekuláris diagnosztikai laboratóriumban kivitelezni a vizsgálatot, kórházi laborokban is elvégezhető, ahol gyors döntésekre van szükség a betegek benntartásáról.

Mik a korlátai?

  • A mintavétel speciális mintavételi eszközt és szaktudást igényel, kellően képzett és gyakorlott személy végezheti védőfelszerelésben.
  • A nem megfelelő mintavétel álnegatív eredményhez vezethet.
  • Mivel érzékenysége alacsonyabb a PCR-nél, elsődlegesen olyan esetben használható, ahol magas a betegség előfordulási gyakorisága, tehát a pozitív eredmények száma várhatóan magas lesz.
  • Ha túl korán, a betegség kezdeti fázisában történik a mintavétel, születhet negatív eredmény, mivel az RNS-hez képest a vírusfehérjék később válnak kimutathatóvá a légutakban.
  • Kizárólag kvalitatív tesztelésre alkalmas, mennyiségeket nem mutat, az eredmény így csak pozitív vagy negatív minősítésű lehet.

3. SZEROLÓGIAI VIZSGÁLATOK (Covid-19 specifikus antitestek kimutatása vérmintából)

A szerológiai tesztek a vírus ellen termelődött ellenanyagokat mutatják ki vérmintából. Az antitest kimutatási metodikák a szervezet válaszreakciójáról adnak képet, így a vizsgálatok információtartalma különbözik a direkt víruskimutatási eljárásokétól.

Míg a PCR és az antigén teszt a vírus jelenlétét igazolhatja, addig a szerológiai tesztek azt vizsgálják, hogy korábban találkoztunk-e a vírussal, elkezdődött-e már egy arra specifikus válaszreakció.

Akut fertőzés kimutatására a szerológiai tesztek önmagukban nem alkalmasak, de segítséget nyújtanak a betegség teljes diagnosztikájában, kiegészíthetik a közvetlen kórokozó-kimutatási módszereket, komplexebbé téve azok eredményének értékelését.
Segíthetnek a tünetmentes fertőzöttek, illetve a fertőzésen már átesett, immunitást szerzett személyek felderítésében.

Rapid antitest tesztek

Ezek a tesztek a vérben található COVID-19 specifikus ellenanyagok (IgM és IgG) gyors, „ágymelletti” kimutatására szolgálnak.

Számos ilyen teszt került forgalomba hazánkban is, azonban nem mindegy, hogy az adott tesztről milyen gyártói bevizsgálási adatok állnak rendelkezésre, milyen a tesztek teljesítőképessége (érzékenysége, specificitása, reprodukálhatósága) és azokat mennyire tudja igazolni professzionális laboratórium a gyakorlatban.



Hogyan történik a vizsgálat?

  • A vizsgálatot natív vérminta savójából javasolt elvégezni.
  • Eredmény: a vizsgálatot végző laboratóriumba érkezéstől számítva akár 15 perc/minta.

Mik a vizsgálat előnyei?

  • Gyorsan elvégezhető, akár ágy mellett is.
  • A legkedvezőbb árú tesztek.
  • Az eredmények leolvasásához nem szükséges külön eszköz, a tesztkazetta szemmel is értékelhető.

Mik a vizsgálat korlátai?

  • Pontatlanabb az automatizált antitest tesztekhez képest (lsd. lejjebb), hiszen a gyorstesztekre jellemző módon, a fals eredmények nagyobb számban fordulhatnak elő.
  • A leolvasási idő be nem tartása hibás eredményhez vezethet.
  • Lokális felhasználás és az ujjbegyből történő vérvétel esetén nem végezhető nagy tömegben. (Ugyanakkor a vizsgálat érzékenysége és volumene növelhető, ha nem ujjbegyből történik a mintavétel, hanem vénás vérből, és professzionális laboratóriumi környezetben történik a feldolgozás.)
  • Csak kvalitatív eredményt ad, így az ellenanyagválasz időbeli változásának megítélésre kevésbé alkalmas.
  • Az eredmény álnegatív lehet, ha a betegség korai fázisában történik a mintavétel.
  • Más vírusok hasonló fehérjéi ellen termelődött antitestek keresztreakciót okozhatnak, mely álpozitív eredményhez vezethet! (A specificitást befolyásolja, hogy a vírus melyik antigénje ellen termelődött antitestet vizsgálja a teszt és az mennyire specifikus a SARS-CoV-2 vírusra.)
  • Nem tudni, hogy a vizsgált IgG antitest tartós védelmet nyújt-e a páciens számára a további SARS-CoV-2 fertőzésekkel szemben, vagy sem.
  • Az eredmények értékelését megnehezíti, hogy az akut immunválaszra jellemző IgM akár tartósan is jelen lehet a vérben, annak ellenére, hogy a vírus esetleg már nem kimutatható a légutakban, és ez téves következtetésekhez vezethet (akutnak minősítik a fertőzést).

Mire figyeljünk a teszt kiválasztásánál?

  • Rendelkezik-e a teszt diagnosztikai minősítéssel? (Több, piacon elérhető teszt csak kutatási célra használható!)
  • Ismert-e, hogy milyen a különböző gyártási sorozatok megbízhatósága? (Előfordulhat, hogy az egyik sorozatú teszt még működik, míg egy másik már nem. A gyártónak ellenőrizni és biztosítania kell, hogy a különböző időpontban gyártott sorozatok azonos minőséget hozzanak.)
  • Van-e adat arról, hogy mely kórokozókkal vizsgálták be a keresztreaktivitás lehetőségét, ami esetleges álpozitív eredményhez vezethet?
  • Rendelkezésre áll-e adat arról, hogy a betegség melyik fázisában, hány páciensen vizsgálták be a teszt teljesítőképességét (szenzitivitását és specificitását)?

Fentiek miatt mindenképpen javasolt, hogy az ilyen teszteket professzionális laboratóriumi szolgáltatótól igényeljék, ahol a szaktudás rendelkezésre áll az eredmények értelmezéséhez.

Automatizált antitest (ELISA és egyéb immunoassay-alapú) tesztek

Ezek a tesztek a SARS-CoV-2 elleni IgG vagy IgA/IgM immunoglobulin osztályú humán antitestek kimutatását jelentik nagy teljesítményű automatákon és kiegészítik a közvetlen kórokozó kimutatási módszereket. Ezenkívül epidemiológiai adatok gyűjtésére is felhasználhatók.

Az antitest kimutatási eredmények helyes értékelése érdekében (hasonlóan más fertőzéses betegségekhez) két betegmintát szükséges megvizsgálni ahhoz, hogy a szerológiai státusz megítélhető legyen, egyet az akut fázisból, ami a betegség 1. hete, a másikat pedig 2–4 héttel később.

Hogyan történik a vizsgálat?

  • A vizsgálat natív vérminta savójából végezhető.
  • Eredmény: a laboratóriumba érkezéstől néhány órán belül.

Mik a vizsgálat előnyei?

  • Automatizálható, így nagy tömegű szűrésre is alkalmas.
  • Kevesebb az álpozitív vagy álnegatív eredmény, mivel érzékenysége és specificitása sokkal jobb, mint a rapid antitest teszteké.
  • A jobb minőségű tesztek a vírus S1 proteinje ellen termelődött antitestet mutatják ki, mely magasabb specificitást tesz lehetővé.
  • Ellenőrzött minőségű, bevizsgált, megbízható tesztek.

A koronavírus-járvány kitörését követően a diagnosztikai piac számos neves szereplője kezdett el automatizált SARS-CoV-2 szerológiai tesztet fejleszteni, ezek bevezetése a SYNLAB diagnosztikai portfóliójába jelenleg zajlik.


Mik a vizsgálat korlátai?

  • Egyes tesztek csak kvalitatív eredményt adnak, így az ellenanyag-válasz időbeli változásának megítélésre kevésbé alkalmasak.
  • Az eredmény álnegatív lehet, ha a betegség korai fázisában történik a mintavétel, ugyanakkor a szenzitivitás növelhető, ha a betegség későbbi szakaszában történő mintavétel esetén többféle antitest (pl.: IgA/IgM és IgG) együttes vizsgálata történik meg.
  • Álpozitív eredmény születhet a vírus más antigénje ellen termelődött antitest kimutatása esetén (más vírusok, pl.: SARS-CoV-1 hasonló fehérjéi ellen termelődött antitestek keresztreakciót okozhatnak)

Fontos!
A szerológiai vizsgálatok egyike sem alkalmas önmagában az akut fertőzés bizonyítására!
Egyetlen vérmintából egyik antitestvizsgálati módszer sem tudja bizonyítani vagy kizárni az esetleges fertőződést! A savópár vizsgálat (két betegminta a betegség két fázisában) lehet alkalmas a szerológiai státusz tisztázására, de ez víruskimutatás nélkül nem zárhatja ki az éppen aktuális fertőzőképességet.


Az RT-PCR vizsgálat és az antitest szűrés együttes alkalmazása nagyobb biztonságot ad a fertőzöttek felismerésében és elkülönítésében!



A VIZSGÁLATOK EGYMÁSHOZ VALÓ VISZONYA, EGYÜTTES ALKALMAZHATÓSÁG

Önmagukban a szerológiai tesztek (így a rapid antitest vizsgálatok is) korlátozott információtartalommal rendelkeznek csak, PCR vizsgálattal kombinálva viszont lényegesen több információhoz juthatunk.

Teszt eredmények Klinikai értelmezési lehetőségek
RT-PCR IgM IgG
+ - - A fertőzőképesség igazolható, ellenanyag-válasz még nem detektálható, ezért a fertőzés korai stádiuma valószínűsíthető.
+ + - A páciens a fertőzés korai szakaszában lehet, fertőzőképes.
+ + + A páciens még a fertőzés aktív szakszában van, a specifikus ellenanyagok is megjelentek. Fertőzőképes állapot.
+ - + A páciens a fertőzés későbbi szakaszában lehet, de még biztosan fertőzőképes.
- + - A páciens a fertőzés korai szakaszában lehet (ez esetben a PCR eredménye álnegatív), vagy az IgM eredménye álpozitív. Mivel az IgM pozitivitás önmagában lehetséges álpozitivitás, ezért mindenképpen szükséges a PCR és az antitest kimutatás megismétlése.
- + + A páciens a gyógyulási szakaszban lehet, vagy korábban már áteshetett a fertőzésen (IgM perzisztáló jelenléte mellett). A PCR vizsgálat megismétlése mérlegelendő.
- - + A páciens korábban már áteshetett a fertőzésen és rendelkezik immunitással.

Összefoglalva

  • amennyiben a PCR eredménye és az antitest eredményei negatívak lettek, megnyugodhat: igen nagy valószínűséggel kizárható, hogy fertőzött lenne a vírussal. Ugyanakkor védettséggel sem rendelkezik, tehát továbbra is óvatosnak kell lennie, figyelnie kell a megelőzésre! (maszk viselése, fizikai távolságtartás, kontaktus lehetőségek csökkentése, rendszeres kézfertőtlenítés stb.)
  • ha a PCR eredménye és az IgM eredménye negatív, míg az IgG pozitív, akkor nagy valószínűséggel már találkozott a vírussal és rendelkezik védettséggel. Megnyugodhat, de továbbra is legyen óvatos! (Előfordulhat újrafertőződés, hiszen a vírus mutálódhat!)
  • Minden más esetben feltétlenül konzultáljon háziorvosával vagy a Nemzeti Népegészségügyi Központ (NNK) hivatalos csatornáin keresztül vegye fel a kapcsolatot az illetékesekkel!